Plasmide CRISPR d'Activation (h) SP-A1: sc-400974-ACT

SFTPA1 code la protéine A1 du surfactant (SP-A1), une collectine sécrétée par les cellules épithéliales alvéolaires de type II, qui contribue au maintien de l’homéostasie du surfactant pulmonaire et à la surveillance immunitaire innée à l’interface air–liquide. SP-A1 se lie aux glucides microbiens et à des ligands endogènes afin de moduler l’opsonisation, l’agglutination et l’activité des phagocytes, influençant ainsi la signalisation inflammatoire dans le poumon distal. Par ses interactions avec les voies de reconnaissance des motifs (pattern recognition) et l’organisation lipidique du surfactant, SP-A1 participe à la régulation de la stabilité alvéolaire et de la défense de l’hôte en contexte de stress environnemental et infectieux. Une expression ou une fonction altérée de SP-A1 a été associée à une susceptibilité accrue à des phénotypes pulmonaires inflammatoires et fibrotiques, et constitue un point d’entrée mécanistique pour étudier la biologie des maladies des voies aériennes et des alvéoles.

SP-A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SFTPA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SP-A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SFTPA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SFTPA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SP-A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SFTPA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SP-A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SP-A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SFTPA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.