Sox-21 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406354-ACT

SOX21 codifica Sox-21, un fattore di trascrizione con dominio HMG (high mobility group) box che modula programmi di espressione genica responsabili delle decisioni sul destino cellulare durante lo sviluppo embrionale e l’omeostasi dei tessuti. Sox-21 è strettamente associato alla differenziazione neurale ed epiteliale, dove interagisce con le principali reti trascrizionali e con vie di segnalazione sensibili agli stimoli per coordinare l’impegno di linea, il mantenimento dei progenitori e la maturazione. Modellando stati regolatori della cromatina accessibile e gli output trascrizionali, SOX21 influenza processi quali la neurogenesi, la dinamica di cellule staminali/progenitrici e il rimodellamento epiteliale. Un’espressione disregolata di SOX21 è stata riportata in contesti di differenziazione anomala e di controllo proliferativo alterato, a supporto del suo utilizzo come nodo meccanicistico per studiare la biologia dello sviluppo e il rimodellamento trascrizionale associato alle malattie.

Sox-21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX21 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX21 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX21, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-21. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX21 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-21 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-21 nelle cellule tumorali con espressione di SOX21 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.