Sox-18 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402913-ACT

SOX18 codifica Sox-18, un fattore di trascrizione con dominio HMG-box che si lega al DNA e coopera con altri membri della famiglia SOX per regolare programmi genici che controllano lo sviluppo vascolare e linfatico, la specificazione endoteliale e la morfogenesi tissutale. Sox-18 influenza reti trascrizionali legate all’integrità delle giunzioni endoteliali, alla gemmazione dei vasi e al rimodellamento, intersecandosi con assi di segnalazione quali le risposte angiogeniche guidate da VEGF e i circuiti trascrizionali dello sviluppo. Un’alterata attività di SOX18 è stata associata a una patterning vascolare/linfatica disregolato e all’angiogenesi associata ai tumori, rendendolo rilevante per lo studio della plasticità delle cellule endoteliali e della regolazione del microambiente. Nei modelli cellulari umani, la modulazione dell’espressione di Sox-18 è comunemente utilizzata per indagare le decisioni di destino cellulare, la funzione di barriera e le reti regolatorie geniche vascolari.

Sox-18 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX18 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-18 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX18 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX18, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-18. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX18 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-18 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-18 nelle cellule tumorali con espressione di SOX18 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.