Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sox-1 (m): sc-423077

Présentation

Sox1 code le facteur de transcription Sox-1, une protéine de liaison à l’ADN de type boîte HMG (HMG-box) qui intervient précocement dans la spécification du neuroectoderme et le maintien de l’identité des progéniteurs neuraux au cours du développement chez la souris. Sox-1 régule des programmes d’expression génique qui contrôlent les décisions de destin cellulaire, la prolifération et la différenciation au sein du système nerveux central, en s’intégrant à des réseaux transcriptionnels plus larges médiés par SoxB1 ainsi qu’aux voies de signalisation qui organisent le patronage du tube neural. Les programmes associés à SOX1 lorsqu’ils sont dérégulés sont étudiés dans le contexte de trajectoires neurodéveloppementales aberrantes et d’infidélité de lignée dans les tumeurs d’origine neurale, où des basculements entre états progéniteurs et différenciés peuvent influencer des phénotypes pertinents pour la maladie. En tant que régulateur du développement, Sox-1 est fréquemment utilisé comme marqueur et comme nœud mécanistique pour modéliser l’engagement neuronal dans des systèmes de biologie des cellules souches et de biologie du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sox-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sox1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sox1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sox1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sox-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sox1 pour l'étude de la signalisation de Sox-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sox1 essentiels à la fonction de Sox-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sox1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sox-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sox-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sox1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sox-1 plasmide HDR (m) et le Sox-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sox1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sox1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.