Sox-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423077

Panoramica

Sox1 codifica il fattore di trascrizione Sox-1, una proteina legante il DNA con dominio HMG-box che agisce precocemente nella specificazione del neuroectoderma e nel mantenimento dell’identità dei progenitori neurali durante lo sviluppo del topo. Sox-1 regola programmi di espressione genica che controllano le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione all’interno del sistema nervoso centrale, integrandosi con reti trascrizionali più ampie mediate da SoxB1 e con le vie che orchestrano il patterning del tubo neurale. I programmi associati a SOX1, quando deregolati, vengono studiati nel contesto di traiettorie neuroevolutive aberranti e di infedeltà di linea nei tumori di origine neurale, dove cambiamenti tra stati progenitori e stati differenziati possono influenzare fenotipi rilevanti per la malattia. In quanto regolatore dello sviluppo, Sox-1 è spesso utilizzato come marcatore e come nodo meccanicistico per modellare l’impegno (commitment) neurale in sistemi di biologia delle cellule staminali e di biologia dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sox-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sox1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sox1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sox1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sox-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sox1 per lo studio della segnalazione di Sox-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sox1 critici per la funzione di Sox-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sox1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sox-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sox-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sox1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sox-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sox-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sox1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sox1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.