Sos 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402199-ACT

Humanes **SOS2** kodiert den „Son of Sevenless“-Homolog 2 (Sos2), einen Ras-Guaninnukleotid-Austauschfaktor, der aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen mit der RAS-MAPK-Signalübertragung koppelt. Sos2 fördert den Austausch von GDP gegen GTP an RAS und beeinflusst damit den Output des ERK-Signalwegs, Transkriptionsprogramme, Proliferation, Differenzierung sowie stressresponsive Signalgebung downstream von Adapterkomplexen wie GRB2. Durch die Abstimmung mit parallelen RAS-Regulatoren trägt SOS2 zur Dynamik des Signalwegs und zur Signalstärke bei, die Zellschicksalsentscheidungen prägen. Eine fehlregulierte RAS-MAPK-Signalübertragung ist ein häufiges Merkmal oncogener Transformation und entwicklungsbedingter Erkrankungen, wodurch SOS2 ein nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Umverdrahtung von Signalwegen und kompensatorischer Signalgebung ist.

Sos 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SOS2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sos 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SOS2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SOS2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sos 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SOS2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sos 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sos 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SOS2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.