SorLA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403088-ACT

ヒトSORL1はSorLAをコードしており、SorLAはVPS10ドメインをもつソーティング受容体として、神経細胞を含むさまざまな細胞種でエンドソーム輸送および受容体リサイクリングを制御します。SorLAはアミロイド前駆体タンパク質（APP）の細胞内ルーティングを調節し、トランスゴルジネットワーク、エンドソーム、細胞表面の間でカーゴの行き先を振り分けることで、アミロイド生成（アミロイドジェニック）経路によるプロセシングに影響を与えます。小胞輸送とリソソーム関連の分解・ターンオーバーにおける役割を通じて、SorLAはプロテオスタシス、シナプス機能、脂質受容体の取り扱いに寄与し、SORL1の機能異常をアルツハイマー病の遺伝学および神経変性に伴うエンドソーム機能障害と結び付けています。そのため、SorLA活性の変化は、APPプロセシング、エンドソーム成熟、神経細胞の恒常性を司る経路において広く研究されています。

SorLA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SORL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SorLA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SORL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSORL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SorLAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSORL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSorLA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSORL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSorLA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。