Somatostatin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400280-ACT

Das humane **SST**-Gen kodiert **Somatostatin**, ein Peptidhormon, das im Nervensystem und in endokrinen Geweben breit exprimiert wird und die Sekretion von Wachstumshormon, Insulin, Glukagon sowie mehrerer gastrointestinaler Hormone hemmt. Somatostatin signalisiert hauptsächlich über G‑Protein‑gekoppelte Somatostatinrezeptoren (SSTR1–SSTR5) und vermittelt dabei eine Gi/o‑abhängige Hemmung der Adenylylcyclase, eine Modulation von Ionenkanälen sowie eine nachgeschaltete Regulation der MAPK‑ und PI3K‑Signalwege, um Erregbarkeit, Sekretion und Zellproliferation fein abzustimmen. In neuroendokrinen und pankreatischen Kontexten trägt SST zur parakrinen Kontrolle der Hormonfreisetzung in den Langerhans-Inseln und zur stressresponsiven neuroendokrinen Signalübertragung bei. Eine fehlregulierte Somatostatin-Signalgebung ist relevant für Studien zur metabolischen Homöostase, zur neuroendokrinen Differenzierung und zur Biologie hormongetriebener Erkrankungen, einschließlich Modellen der Dysfunktion pankreatischer Inselzellen und neuroendokriner Tumorphänotypen.

Somatostatin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SST-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Somatostatin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SST-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SST-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Somatostatin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SST-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Somatostatin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Somatostatin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SST-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.