Partículas Lentivirales de Activación (h) SOAT2: sc-409713-LAC

SOAT2 (esterol O-aciltransferasa 2; ACAT2) es una enzima de membrana del retículo endoplásmico que cataliza la formación de ésteres de colesterilo a partir de colesterol y acil‑CoA de ácidos grasos de cadena larga, favoreciendo el almacenamiento intracelular de colesterol y el ensamblaje de lipoproteínas. Está enriquecida en hepatocitos y enterocitos intestinales, donde contribuye a la absorción de lípidos, la secreción de VLDL y la homeostasis global de los esteroles. La actividad de SOAT2 se integra con programas metabólicos lipídicos impulsados por SREBP, la remodelación lipídica del RE y las respuestas celulares a la sobrecarga de esteroles, lo que puede influir en la biología de las células espumosas y en la señalización inflamatoria. El metabolismo desregulado de ésteres de colesterilo en el que participa SOAT2 es relevante para los mecanismos de enfermedades metabólicas y patologías asociadas a lípidos estudiadas en modelos de investigación de aterosclerosis, hígado graso y dislipidemia.

Las partículas de activación lentiviral SOAT2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SOAT2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SOAT2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SOAT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SOAT2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SOAT2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.