Plásmido CRISPR de Activación (h) SOAT2: sc-409713-ACT

La SOAT2 humana (sterol O-aciltransferasa 2), también conocida como ACAT2, es una enzima localizada en el retículo endoplásmico que cataliza la esterificación del colesterol con acil‑CoA de ácidos grasos de cadena larga para formar ésteres de colesterol. Esta reacción favorece el almacenamiento intracelular de colesterol, la biogénesis de gotículas lipídicas y el ensamblaje de lipoproteínas, vinculando la actividad de SOAT2 con la homeostasis de los esteroles y con redes metabólicas lipídicas más amplias. SOAT2 actúa en la interfaz entre el tráfico de colesterol, la absorción intestinal y el manejo hepático de lípidos, influyendo en vías que regulan la composición de membranas y la amortiguación de lípidos neutros. La desregulación del metabolismo de los ésteres de colesterol y los cambios en la expresión de SOAT2 se han asociado con fenotipos relevantes para enfermedades metabólicas y cardiovasculares, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del estrés celular y la remodelación impulsados por lípidos.

SOAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SOAT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SOAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SOAT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SOAT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SOAT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SOAT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SOAT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SOAT2 en células tumorales con expresión de SOAT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.