SOAT1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-417623-LAC

SOAT1 (Sterol-O-Acyltransferase 1; ACAT1) ist ein Enzym der Membran des endoplasmatischen Retikulums, das freies Cholesterin mit langkettigem Fettsäureacyl-CoA verestert und so Cholesterinester für die Speicherung in Lipidtröpfchen bildet. Indem SOAT1 das Gleichgewicht zwischen unverestertem Cholesterin und gespeicherten Cholesterinestern steuert, trägt es zur Regulation der Membranzusammensetzung, der Sterolhomöostase und des lipoproteinassoziierten Lipidhandlings bei. Die SOAT1-Aktivität überschneidet sich mit dem Cholesterintransport, der Biologie von Schaumzellen und umfassenderen Programmen des Lipidstoffwechsels, die oxidativen Stress und inflammatorische Signalwege beeinflussen. Eine fehlregulierte Anreicherung von Cholesterinestern und veränderte SOAT1-Expression wurden mit der Biologie atherosklerotischer Läsionen in Verbindung gebracht und zudem im Kontext des Lipid-Remodelings in Tumoren sowie eines mit neurodegenerativen Erkrankungen assoziierten Cholesterinungleichgewichts untersucht.

SOAT1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SOAT1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SOAT1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SOAT1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SOAT1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SOAT1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.