Plasmide CRISPR d'Activation (h) SNX9: sc-403578-ACT

La SNX9 humaine (sorting nexin 9) est un adaptateur à domaine PX-BAR qui relie la reconnaissance des phosphoinositides au remodelage membranaire et à la dynamique de l’actine. Elle intervient dans l’endocytose médiée par la clathrine en coordonnant les composants AP-2/clathrine avec la scission des vésicules dépendante de la dynamine, et en couplant les sites endocytaires à la polymérisation de l’actine pilotée par Arp2/3 via des interactions avec N-WASP et des facteurs apparentés. Par ces fonctions, SNX9 contribue à l’internalisation des récepteurs, au trafic intracellulaire et à l’atténuation des signaux, en influençant des voies telles qu’EGFR et d’autres réseaux de signalisation liés aux RTK. Une expression ou une fonction altérée de SNX9 a été associée à un dérèglement du trafic vésiculaire et à des états de signalisation anormaux observés dans des contextes de cancer et de maladies neurobiologiques, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation couplée à l’endocytose.

SNX9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNX9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNX9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNX9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNX9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNX9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNX9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNX9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNX9 dans les cellules tumorales présentant une expression de SNX9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.