SNX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427326

Übersicht

Snx5 kodiert Sorting Nexin 5 (SNX5), ein Adapterprotein mit PX-Domäne, das an phosphoinositidreiche endosomale Membranen bindet und an endosomalem Sorting sowie der Bildung von Membrantubuli beteiligt ist. SNX5 wirkt in Rezeptortransport- und Recyclingwegen, einschließlich Prozessen, die mit Retromer- und SNX-BAR-assoziierten Komplexen koordiniert sind, welche endosomale Carrier formen und die Rückgewinnung von Fracht aus frühen Endosomen regulieren. Über die Kontrolle des Rezeptorumsatzes und der Signaldauer beeinflusst SNX5 den vesikulären Transport, die Zellpolarisation und die Membranhomöostase. Fehlregulierte endozytotische Transportnetzwerke, an denen Sorting Nexine beteiligt sind, wurden mit Neurodegeneration, krebsassoziierter Umprogrammierung von Signalwegen und Immundysfunktionen in Verbindung gebracht, wodurch Snx5 einen nützlichen Knotenpunkt für pfadfokussierte Forschung in Mausmodellen darstellt.

Das SNX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Snx5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Snx5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Snx5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SNX5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Snx5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SNX5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Snx5-Exone abzielen, die für die SNX5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Snx5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SNX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SNX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Snx5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SNX5 HDR-Plasmid (m) und SNX5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Snx5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Snx5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.