SNX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404660

Übersicht

Humanes SNX5 (Sorting Nexin 5) kodiert ein PX-Domänen-haltiges endosomales Protein, das an Phosphoinositide bindet und mit Faktoren des Membranremodelings zusammenwirkt, um die Sortierung von Frachtproteinen und den vesikulären Transport zu regulieren. SNX5 ist an Transportwegen vom Endosom zum Golgi sowie am endosomalen Recycling beteiligt und unterstützt den Rezeptorumsatz und die Abschwächung von Signalen, indem es die subzelluläre Lokalisation von Transmembranproteinen steuert. Über seine Funktionen bei der endosomalen Tubulation und der Assemblierung von Proteinkomplexen beeinflusst SNX5 Prozesse der zellulären Homöostase, die mit rezeptorvermittelter Signalübertragung, Nährstoffaufnahme und Membranzusammensetzung verknüpft sind. Veränderte endosomale Transportwege unter Beteiligung von Sorting Nexins stehen mit fehlregulierter Wachstumsfaktor-Signalgebung und zellulären Stressantworten in Zusammenhang, wodurch SNX5 für mechanistische Studien zu krankheitsassoziierten Defekten im Vesikeltransport relevant ist.

Das SNX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SNX5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SNX5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SNX5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SNX5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SNX5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SNX5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SNX5-Exone abzielen, die für die SNX5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SNX5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SNX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SNX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SNX5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SNX5 HDR-Plasmid (h) und SNX5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SNX5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SNX5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.