SNAP 25 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401138-ACT

Das humane SNAP25 kodiert das synaptosomenassoziierte Protein 25, ein zentrales t‑SNARE, das zusammen mit Syntaxin und VAMP/Synaptobrevin assembliert und so das Andocken synaptischer Vesikel sowie die Ca²⁺‑getriggerte Membranfusion antreibt. Die Aktivität von SNAP25 ist entscheidend für die regulierte Exozytose und beeinflusst im SNARE‑vermittelten Vesikeltransportweg die Wahrscheinlichkeit der Neurotransmitterfreisetzung, die Kurzzeitplastizität und das präsynaptische Vesikelrecycling. Indem SNAP25 die Vesikelfusion an die Kalziumsignalgebung und die präsynaptische Organisation des Zytoskeletts koppelt, wirkt es auf die Erregbarkeit neuronaler Netzwerke und die Reifung neuronaler Schaltkreise ein. Veränderte SNAP25‑Expression oder ‑Funktion wurde in genetischen und funktionellen Studien mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was SNAP25 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Mechanismen synaptischer Dysfunktion macht.

SNAP 25 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNAP25-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SNAP 25 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNAP25-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNAP25-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SNAP 25-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNAP25-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SNAP 25-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SNAP 25-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNAP25-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.