SMG5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406989-ACT

SMG5は、ナンセンス変異依存mRNA分解（NMD）機構の保存性の高い中核構成要素をコードしており、異常mRNAの認識と分解を促進することでトランスクリプトームの完全性を保護する。SMG5はリン酸化UPF1と結合し、SMG6およびSMG7と協働してPP2Aを介したUPF1の脱リン酸化と、それに続く分解過程を調整することで、監視機構を翻訳終結およびRNA品質管理と結び付けている。NMDを通じてSMG5は、早期終止コドンを含む転写産物や一部の生理的mRNAアイソフォームの蓄積を抑えることで、遺伝子発現プログラム、ストレス応答、プロテオスタシスに影響を与える。NMDの破綻は、がんに伴うトランスクリプトーム再編やナンセンス変異に起因する遺伝性疾患など、疾患に関連する多様な状況に関与するとされており、SMG5は機構的なRNA生物学研究における有用な結節点となる。

SMG5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMG5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMG5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMG5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMG5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMG5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMG5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMG5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMG5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMG5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。