SmcY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-403217-KO-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- SmcY Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im SmcY-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SmcY: sc-293280
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SmcY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) | sc-403217-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
KDM5D kodiert die Y‑chromosomal verknüpfte Lysin-Demethylase SmcY, ein Enzym mit JmjC-Domäne, das H3K4me3/me2-Markierungen entfernt und dadurch Transkriptionsprogramme sowie die Chromatinzugänglichkeit reguliert. Durch die Umgestaltung der promotorassoziierten Histonmethylierung trägt SmcY zur epigenetischen Kontrolle von Zellzustandsübergängen, linien-/gewebespezifischer Genexpression und zur Koordination DNA‑templierter Prozesse wie Replikation und Reparatur bei. Variationen oder Fehlregulationen der Aktivität der KDM5‑Familie wurden mit veränderten Differenzierungs- und Proliferationsphänotypen in Verbindung gebracht, und KDM5D wird häufig im Kontext männlich-spezifischer Genregulation und Y‑chromosomaler Beiträge zur Krankheitsbiologie untersucht. Als epigenetischer Modulator bietet SmcY einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie Dynamiken der Histonmethylierung Signalausgänge und die Genomregulation in menschlichen Zellen beeinflussen.
Das SmcY CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KDM5D-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KDM5D-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KDM5D nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SmcY-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KDM5D-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SmcY-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf KDM5D-Exone abzielen, die für die SmcY-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere KDM5D-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom SmcY CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SmcY CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KDM5D-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SmcY HDR-Plasmid (h) und SmcY HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KDM5D-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KDM5D-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.