Smarcad1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420234-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Smarcad1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Smarcad1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Smarcad1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Smarcad1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Smarcad1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420234-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smarcad1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420234-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Smarcad1 kodiert einen ATP-abhängigen Chromatin-Remodeling-Faktor der SNF2-Familie, der zur Regulation der Nukleosomendynamik während der DNA-Replikation und -Reparatur beiträgt. SMARCAD1 ist an der Wiederzusammensetzung des Chromatins an Replikationsgabeln beteiligt, fördert die Endresektion an Doppelstrangbrüchen und unterstützt die homologe Rekombination, während es aberrante Rekombinationsereignisse begrenzt. Über Interaktionen mit Replikations- und Reparaturkomplexen beeinflusst es die Transkriptionsregulation, die Aufrechterhaltung von Heterochromatin und die Genomstabilität. Eine veränderte SMARCAD1-Funktion wurde mit Defekten in DNA-Schadensantworten und epigenetischer Regulation in Verbindung gebracht und ist daher relevant für Studien zu genomischer Instabilität, Entwicklungsphänotypen und krebsassoziierter Chromatin-Dysregulation.
Smarcad1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Smarcad1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Smarcad1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Smarcad1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Smarcad1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.