Plasmide CRISPR d'Activation (h) Smad7: sc-400251-ACT

SMAD7 code Smad7, une SMAD inhibitrice qui agit comme un régulateur négatif majeur des voies de signalisation TGF-β et BMP en interférant avec la phosphorylation des R-SMADs médiée par les récepteurs et en favorisant la diminution de l’expression des récepteurs. En modulant des programmes transcriptionnels dépendants des SMAD, Smad7 influence la transition épithélio-mésenchymateuse, le remodelage de la matrice extracellulaire, le contrôle du cycle cellulaire et les interactions (« crosstalk ») avec les voies de signalisation inflammatoires. Une expression altérée de SMAD7 a été associée à des réponses fibreuses dérégulées, à une homéostasie immunitaire perturbée et à un contrôle de la croissance anormal dans divers contextes tissulaires. Ces liens entre voies de signalisation font de SMAD7 une cible utile pour disséquer la régulation par rétroaction au sein des réseaux TGF-β/BMP et leurs sorties transcriptionnelles en aval.

Smad7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMAD7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Smad7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMAD7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMAD7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Smad7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMAD7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Smad7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Smad7 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMAD7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.