Sm D3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405302

Übersicht

SNRPD3 kodiert das Sm-D3-Kernprotein, eine konservierte Komponente des Sm-Rings, der sich an snRNAs anlagert, um spliceosomale kleine nukleäre Ribonukleoproteine (snRNPs) zu bilden. Sm D3 unterstützt die snRNP-Biogenese und die Genauigkeit des Prä-mRNA-Spleißens und ist damit mit der Dynamik der Spleißosomenassemblierung sowie der Qualitätskontrolle der RNA-Prozessierung verknüpft. Störungen von Sm-Kernproteinen können die Nutzung von Transkript-Isoformen verschieben und Genexpressionsprogramme beeinflussen, die den Zellzyklus, Stressantworten und Differenzierung steuern. Da aberrantes Spleißen ein häufiges Merkmal vieler Krankheitszustände ist, wird SNRPD3 häufig als Knotenpunkt untersucht, der die Integrität des Spleißosoms mit genomweiten Phänotypen der RNA-Reifung in menschlichen Zellen verbindet.

Das Sm D3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SNRPD3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SNRPD3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SNRPD3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sm D3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SNRPD3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sm D3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SNRPD3-Exone abzielen, die für die Sm D3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SNRPD3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sm D3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Sm D3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SNRPD3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sm D3 HDR-Plasmid (h) und Sm D3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SNRPD3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SNRPD3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.