Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLM-2: sc-407141-ACT

Le gène humain **KHDRBS3** code **SLM-2**, une protéine de liaison à l’ARN de la famille **STAR** qui régule l’épissage alternatif et la maturation de l’ARN en reconnaissant des motifs de séquence spécifiques dans les pré-ARNm. SLM-2 influence la sélection des isoformes de transcrits de manière dépendante du tissu et du contexte, façonnant des programmes liés à la fonction neuronale et, plus largement, à la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique. En modulant le choix des sites d’épissage et la maturation des ARNm, KHDRBS3 peut affecter les sorties de signalisation et la diversité du protéome, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des réseaux de régulation de l’ARN et des dérégulations d’épissage observées dans diverses maladies complexes. Une expression altérée ou un déséquilibre des facteurs d’épissage impliquant SLM-2 a été étudié dans le cadre des mécanismes de couplage entre transcription et maturation de l’ARN, ainsi que des changements d’isoformes associés aux maladies.

SLM-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KHDRBS3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLM-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KHDRBS3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KHDRBS3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLM-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KHDRBS3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLM-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLM-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de KHDRBS3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.