SLC48A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426721

Übersicht

Slc48a1 kodiert SLC48A1 (auch als heme-responsive gene 1, HRG1, bekannt), einen lysosomalen Membrantransporter, der Häm nach der Erythrophagozytose sowie nach endosomalem/lysosomalem Turnover hämhaltiger Fracht aus dem Lysosomenlumen ins Zytosol exportiert. Durch die Mobilisierung von lysosomalem Häm für Abbau (Katabolismus) und Recycling unterstützt SLC48A1 die Eisenhomöostase, die Entgiftung von Häm und die von Makrophagen vermittelte Verarbeitung von aus Erythrozyten stammendem Häm. Diese Aktivität steht in Wechselwirkung mit Signalwegen, die den Hämbau, oxidative Stressantworten und das retikuloendotheliale Eisenrecycling steuern. Eine Fehlregulation des lysosomalen Hämtransports ist in entzündlichen und hämatologischen Forschungskontexten relevant, in denen ein gestörtes Häm-/Eisengleichgewicht zu Gewebestress und veränderter Funktion der angeborenen Immunität beiträgt.

Das SLC48A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc48a1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc48a1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc48a1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SLC48A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc48a1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SLC48A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc48a1-Exone abzielen, die für die SLC48A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc48a1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SLC48A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SLC48A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc48a1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SLC48A1 HDR-Plasmid (m) und SLC48A1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc48a1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc48a1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.