SLC35F2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406765-ACT

SLC35F2 (Solute Carrier Family 35 Member F2) ist ein menschlicher Multi-Pass-Membrantransporter, der an der zellulären Aufnahme und intrazellulären Verarbeitung kleiner Moleküle beteiligt ist; beschrieben sind zudem Funktionen im Membrantransport (Trafficking) und in Prozessen des Xenobiotika-Transports. Als Mitglied der SLC35-Familie wird es im Kontext der Transporterbiologie, der zellulären Empfindlichkeit gegenüber bestimmten Substanzen sowie als Determinante der intrazellulären Exposition untersucht, die Stressantwort- und Überlebenssignalwege beeinflusst. Eine veränderte SLC35F2-Expression wurde in transkriptomischen Datensätzen mit krebsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht und wird in Tumorzellmodellen häufig als funktioneller Modulator der Arzneistoffantwort und metabolischer Verwundbarkeit bewertet. Diese Eigenschaften machen SLC35F2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zu transportgekoppelter Signalübertragung, zellulärer Fitness und dem Umbau von Signalwegen unter chemischer oder genetischer Perturbation.

SLC35F2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC35F2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SLC35F2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC35F2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC35F2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SLC35F2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC35F2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SLC35F2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SLC35F2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC35F2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.