SLC35A4 Double Nickase Plasmid (h): sc-414030-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SLC35A4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SLC35A4 Double-Nickase-Plasmid (h) und SLC35A4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC35A4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SLC35A4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-414030-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLC35A4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-414030-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC35A4 kodiert ein Mitglied der Solute-Carrier-Familie 35 der Nukleotidzucker-Transporter, einer Gruppe, die die luminale Versorgung von ER und Golgi mit aktivierten Zuckern für Glykosylierungsreaktionen sicherstellt. Obwohl SLC35A4 weniger gut charakterisiert ist als andere SLC35-Paraloge, wird es mit der Regulation der Nukleotidzucker-Homöostase in Verbindung gebracht, die die Biosynthese von Glykoproteinen und Glykolipiden, die Proteinfaltung und den intrazellulären Transport beeinflusst. Störungen des Nukleotidzucker-Transports und nachgeschalteter Glykosylierungsnetzwerke können die Zusammensetzung und Signalübertragung an der Zelloberfläche umgestalten und dadurch Prozesse wie Adhäsion, Rezeptorreifung und Immunerkennung beeinflussen. Entsprechend ist SLC35A4 für mechanistische Studien in der Glykomik und der Biologie des sekretorischen Weges von Interesse sowie für Untersuchungen dazu, wie veränderte Glykosylierung zu zellulären Stressantworten und krankheitsassoziierten Phänotypen beiträgt.
SLC35A4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC35A4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC35A4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC35A4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC35A4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.