SLC35A3 Double Nickase Plasmid (h): sc-417814-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SLC35A3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SLC35A3 Double-Nickase-Plasmid (h) und SLC35A3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC35A3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SLC35A3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417814-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLC35A3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417814-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC35A3 kodiert einen mit Golgi-Apparat und endoplasmatischem Retikulum (ER) assoziierten Nukleotidzucker-Transporter, der UDP‑N‑Acetylglucosamin in das Lumen importiert, um die N‑Glykosylierung, O‑Glykosylierung und die Biosynthese von Glykolipiden zu unterstützen. Durch die Steuerung der Substratverfügbarkeit für Glykosyltransferasen beeinflusst SLC35A3 die Proteinfaltung, den intrazellulären Transport (Trafficking) und die Zusammensetzung von Glykanen an der Zelloberfläche, die wiederum die Rezeptorsignalgebung und Zell‑Zell‑Interaktionen modulieren. Störungen des UDP‑GlcNAc‑Transports können die Proteostase und glykanabhängige Signalwege beeinträchtigen, wodurch SLC35A3 mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen und breiteren Phänotypen in Verbindung steht, die Neuroentwicklung und metabolische Homöostase betreffen. Seine zentrale Rolle in der Hexosamin-/Glykosylierungsachse macht es zudem relevant für die Untersuchung, wie Nährstoffsensorik in menschlichen Zellen mit Glykan‑Remodelling gekoppelt ist.
SLC35A3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC35A3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC35A3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC35A3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC35A3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.