SLC35A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423599

Übersicht

Slc35a2 kodiert SLC35A2, einen im Golgi-Apparat lokalisierten UDP-Galaktose-Transporter, der Nukleotidzucker-Substrate in den sekretorischen Weg importiert, um die Galaktosylierung von Glykoproteinen und Glykolipiden zu unterstützen. Durch die Regulation der Glykanreifung beeinflusst SLC35A2 die Proteinfaltung, den vesikulären Transport, die Zell-Zell-Adhäsion und die Rezeptorsignalübertragung, mit nachgeschalteten Effekten auf Signalwege, die von einer korrekten Oberflächenglykosylierung abhängen. Störungen des UDP-Galaktose-Transports können die ER/Golgi-Homöostase und die Funktion von Membranproteinen verändern und dadurch Prozesse wie die neuronale Entwicklung und Interaktionen von Immunzellen beeinträchtigen. Eine fehlregulierte, mit SLC35A2 verknüpfte Glykosylierung wurde mit angeborenen Störungen der Glykosylierung sowie breiteren Phänotypen in Verbindung gebracht, die die Neuroentwicklung und die Funktion epithelialer Gewebe betreffen, was SLC35A2 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien in Mausmodellen macht.

Das SLC35A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc35a2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc35a2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc35a2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SLC35A2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc35a2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SLC35A2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc35a2-Exone abzielen, die für die SLC35A2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc35a2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SLC35A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SLC35A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc35a2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SLC35A2 HDR-Plasmid (m) und SLC35A2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc35a2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc35a2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.