Plásmido CRISPR de Activación (h) SLC35A2: sc-408155-ACT

SLC35A2 codifica un transportador de UDP-galactosa localizado en el aparato de Golgi que introduce galactosa activada desde el citosol hacia la luz del Golgi para sostener la galactosilación de glicanos N‑ y O‑ligados y de glicolípidos. Al controlar la disponibilidad de azúcares nucleótido, SLC35A2 influye en la maduración de glicoproteínas, la función de receptores en la superficie celular, el tráfico vesicular y la homeostasis de la vía secretora. La actividad alterada de SLC35A2 se ha vinculado con defectos en la glicosilación de proteínas, con efectos posteriores sobre la señalización celular y el desarrollo tisular, y se estudia con frecuencia en el contexto de los trastornos congénitos de la glicosilación y la biología de mutaciones en mosaico. Por tanto, este gen es relevante para la investigación de mecanismos dependientes de glicanos que modelan la adhesión, el reconocimiento inmunitario y la estabilidad de proteínas de membrana.

SLC35A2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC35A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLC35A2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC35A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC35A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLC35A2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC35A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLC35A2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLC35A2 en células tumorales con expresión de SLC35A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.