SLC25A18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413500

Übersicht

SLC25A18 kodiert einen Carrier der SLC25-Familie in der inneren Mitochondrienmembran, der am Transport von Glutamat über die mitochondriale Membran beteiligt ist und so den Stickstofffluss zwischen Zytosol und Mitochondrien unterstützt. Durch die Regulation der mitochondrialen Verfügbarkeit von Aminosäuren trägt SLC25A18 zur bioenergetischen Homöostase, zum Redoxgleichgewicht und zur anaplerotischen Speisung des Citratzyklus (TCA-Zyklus) bei und beeinflusst damit zelluläre Reaktionen auf Nährstoffstress. Eine veränderte Glutamathandhabung in den Mitochondrien ist relevant für metabolisches Remodeling und Signalwege des oxidativen Stresses, die häufig in der Krebsbiologie und bei neurometabolischen Funktionsstörungen untersucht werden. SLC25A18 wird daher als Werkzeug zur Untersuchung des mitochondrialen Substrattransports, des Aminosäurestoffwechsels und mitochondrienzentrierter Signalnetzwerke eingesetzt.

Das SLC25A18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC25A18-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC25A18-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC25A18 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SLC25A18-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC25A18-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SLC25A18-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC25A18-Exone abzielen, die für die SLC25A18-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC25A18-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SLC25A18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SLC25A18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC25A18-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SLC25A18 HDR-Plasmid (h) und SLC25A18 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC25A18-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC25A18-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.