SKT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431571

Übersicht

Das murine Gen *Etl4* kodiert das SKT-Protein, einen bislang nur unzureichend charakterisierten Faktor, dem prognostisch eine Beteiligung an zellintrinsischen Regulationsprogrammen zur Kontrolle der Genexpression und der zellulären Homöostase zugeschrieben wird. Vorliegende Annotationen deuten auf eine Mitwirkung an grundlegenden Prozessen wie Proliferation, Differenzierung und stressadaptiven Antworten hin, was mit Funktionen in Entwicklungs- und Gewebe-Erhaltungswegen vereinbar ist. Da solche Regulatoren die Verschaltung von Signalwegen und die phänotypische Stabilität beeinflussen können, ist eine Perturbation von SKT nützlich, um Mechanismen zu untersuchen, die krankheitsrelevanten zellulären Zuständen zugrunde liegen, einschließlich dysreguliertem Wachstum und veränderten Linienprogrammen. *Etl4*/SKT‑Loss‑of‑Function‑Modelle unterstützen die Kartierung nachgeschalteter transkriptioneller und Signalweg-Konsequenzen in Maus-Zellen und in vivo.

Das SKT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Etl4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Etl4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Etl4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SKT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Etl4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SKT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Etl4-Exone abzielen, die für die SKT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Etl4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SKT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SKT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Etl4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SKT HDR-Plasmid (m) und SKT HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Etl4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Etl4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.