Plasmide CRISPR d'Activation (h) SKIV2L2: sc-411757-ACT

SKIV2L2 (également connue sous le nom de MTR4) code une hélicase ARN SF2 conservée qui agit comme cofacteur clé de l’exosome nucléaire de l’ARN, en favorisant un remodelage ATP-dépendant des complexes ribonucléoprotéiques afin de permettre la surveillance et le renouvellement des ARN. Elle joue un rôle essentiel dans la maturation et le contrôle qualité des ARNr, des snoARN, des snARN et de multiples classes d’ARN non codants, et contribue à l’homéostasie nucléolaire ainsi qu’à la biogenèse des ribosomes. Grâce à des interactions avec des assemblages adaptateurs tels que des complexes de type TRAMP, SKIV2L2 aide à orienter les transcrits aberrants ou indésirables vers des voies de dégradation médiées par l’exosome. Une dérégulation du métabolisme de l’ARN lié à SKIV2L2 a été associée à des modifications des programmes d’expression génique et à des phénotypes de stress cellulaire, fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans les troubles du traitement des ARN.

SKIV2L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SKIV2L2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SKIV2L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SKIV2L2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SKIV2L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SKIV2L2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SKIV2L2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SKIV2L2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SKIV2L2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SKIV2L2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.