Ska2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405933

Übersicht

SKA2 kodiert die Subunit 2 des Spindel- und Kinetochor-assoziierten Komplexes (Ska2), eine zentrale Komponente des SKA-Komplexes, der mit dem NDC80-Komplex zusammenwirkt, um während der Mitose die Anheftung von Kinetochoren an Mikrotubuli zu stabilisieren. Ska2 unterstützt die Chromosomenkongression und den Beginn der Anaphase, indem es eine persistente endständige Mikrotubulusbindung fördert und zur Abschaltung des Spindelkontrollpunkts beiträgt. Über seine Rolle im mitotischen Fortschreiten beeinflusst SKA2 die Zellzyklusdynamik, die Genauigkeit der Chromosomensegregation und die genomische Stabilität. Eine fehlregulierte SKA2-Expression oder -Funktion wurde in mehreren Krankheitskontexten mit proliferativen Phänotypen und chromosomaler Instabilität in Verbindung gebracht, was SKA2 für mechanistische Studien zu teilungsassoziierten Stressantworten relevant macht.

Das Ska2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SKA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SKA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SKA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ska2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SKA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ska2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SKA2-Exone abzielen, die für die Ska2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SKA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ska2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ska2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SKA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ska2 HDR-Plasmid (h) und Ska2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SKA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SKA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.