Plásmido Doble Nickase (h) SK1: sc-403325-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SK1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SK1 (h) y el plásmido de doble nickasa SK1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KCNN1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SK1 | sc-403325-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SK1 | sc-403325-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El KCNN1 humano codifica el canal de potasio activado por Ca2+ de pequeña conductancia SK1, una conductancia de K+ regulada por calmodulina que vincula la dinámica intracelular de Ca2+ con la repolarización de la membrana. Al modular la poshiperpolarización y los patrones de disparo, SK1 contribuye al control dependiente de Ca2+ de la excitabilidad neuronal y la integración de señales, con funciones adicionales descritas en otros tipos celulares eléctricamente activos y secretores. La actividad de KCNN1 se cruza con la señalización de Ca2+/calmodulina, programas transcripcionales dependientes de la excitabilidad y vías de homeostasis iónica que influyen en las respuestas celulares al estrés. La disfunción de los canales de la familia SK se ha estudiado en el contexto de la neurofisiología y de fenotipos neuropsiquiátricos, donde la excitabilidad intrínseca alterada y la sincronización de redes son lecturas experimentales relevantes.
SK1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCNN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCNN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCNN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCNN1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.