Plasmide CRISPR d'Activation (h) Six3: sc-404026-ACT

Le gène humain **SIX3** code le facteur de transcription à homéoboîte Six3, un régulateur maître de la mise en place de la plaque neurale antérieure ainsi que du développement précoce du prosencéphale et de l’œil. Six3 agit comme une protéine de liaison à l’ADN spécifique de séquence, coordonnant des programmes transcriptionnels qui contrôlent la prolifération des progéniteurs, la différenciation neuronale et l’identité régionale, avec des liens bien établis de régulation croisée avec les voies de signalisation Wnt/β-caténine et Sonic hedgehog (SHH) au cours du neurodéveloppement. Une altération du dosage de **SIX3** ou de son activité régulatrice est associée à des malformations congénitales, notamment l’holoprosencéphalie et des anomalies du développement oculaire, ce qui en fait un nœud précieux pour l’étude des réseaux de régulation génique du développement. Dans des modèles cellulaires, la perturbation de **SIX3** est utilisée pour explorer les transitions d’état de la chromatine, la logique des enhancers et la dynamique de spécification des lignages pertinentes pour la biologie du neurodéveloppement.

Six3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIX3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Six3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIX3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Six3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIX3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Six3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Six3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SIX3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.