SIRP-α Double Nickase Plasmid (m): sc-422514-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SIRP-α Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SIRP-α Double-Nickase-Plasmid (m) und SIRP-α Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sirpa abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SIRP-α: sc-376884
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SIRP-α Double Nickase Plasmid (m) | sc-422514-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRP-α Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422514-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Sirpa* kodiert das Signal-regulatorische Protein alpha (SIRP-α), einen Rezeptor der Immunglobulin-Superfamilie, der überwiegend auf myeloiden Zellen exprimiert wird und dort als inhibitorischer Checkpoint der Phagozytose fungiert. Durch die Bindung an CD47 signalisiert SIRP-α über ITIM-Motive und rekrutiert die Phosphatasen SHP-1/2, wodurch zytoskelettale Umstrukturierungen, Integrin-Signale und angeborene Immunaktivierungswege abgeschwächt werden, die die Aufnahme (Engulfment) und den Entzündungsgrundtonus steuern. Diese Achse beeinflusst die Homöostase von Makrophagen und dendritischen Zellen, die Antigenverarbeitung sowie die Beseitigung apoptotischer Zellen und wird breit in Kontexten wie Tumor-Immunevasion, Transplantationsbiologie sowie autoimmunen oder entzündlichen Phänotypen untersucht. Stamm- und allelabhängige Unterschiede von Maus-SIRP-α können zudem die Xenograft-Kompatibilität und angeborene Immunantworten prägen, wodurch *Sirpa* ein häufiges Ziel in der Immunologie und der Entwicklung von Krankheitsmodellen ist.
SIRP-α Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sirpa-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sirpa abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sirpa-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sirpa-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.