Sigma Receptor Double Nickase Plasmid (h): sc-400615-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Sigma Receptor Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Sigma Receptor Double-Nickase-Plasmid (h) und Sigma Receptor Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SIGMAR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Sigma Receptor: sc-137075
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Sigma Receptor Double Nickase Plasmid (h) | sc-400615-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Sigma Receptor Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400615-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **SIGMAR1** kodiert den Sigma-1-Rezeptor, ein Chaperon der Membran des endoplasmatischen Retikulums, das an mitochondrienassoziierten Membranen angereichert ist und den Kalziumaustausch, die Lipidhomöostase sowie stressresponsive Signalwege reguliert. Durch die Modulation der IP3-Rezeptoraktivität, der ER–Mitochondrien-Kopplung und von Programmen der Unfolded-Protein-Response beeinflusst SIGMAR1 die Proteostase, die Bioenergetik und das Zellüberleben unter oxidativem und proteotoxischem Stress. Die Signalübertragung des Sigma-1-Rezeptors überschneidet sich mit Neurotransmission, Ionenkanalfunktion und entzündlichen Signalwegen und verbindet SIGMAR1 mit Mechanismen, die an Neurodegeneration, neuropathischen Schmerzen und neuropsychiatrischen Phänotypen beteiligt sind. Diese Eigenschaften machen SIGMAR1 zu einem nützlichen Ziel, um Organellkommunikation und Stressadaptationsnetzwerke in humanen Zellmodellen zu untersuchen.
Sigma Receptor Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SIGMAR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SIGMAR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SIGMAR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SIGMAR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.