Particules Lentivirales d'Activation (h) Siglec-9: sc-406675-LAC

SIGLEC9 code Siglec-9, une lectine de type immunoglobuline se liant à l’acide sialique à fonction inhibitrice, principalement exprimée par les neutrophiles, les monocytes et certains sous-ensembles de cellules NK. Via une signalisation dépendante des ITIM et le recrutement de phosphatases telles que SHP-1/2, Siglec-9 atténue les voies des récepteurs activateurs afin de moduler l’activation des leucocytes, la production de cytokines et les réponses cytotoxiques dans le contexte de motifs moléculaires du soi associés et sialylés. Cette régulation de type « checkpoint » influence les interactions cellule–cellule, l’adhésion et la résolution de l’inflammation dans les microenvironnements muqueux et associés aux tumeurs. Une activité dérégulée de SIGLEC9 a été associée à une surveillance immunitaire innée altérée et à des phénotypes inflammatoires, ce qui justifie son étude dans les mécanismes d’échappement immunitaire et la polarisation fonctionnelle des cellules myéloïdes/NK.

Les particules d'activation lentivirales Siglec-9 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SIGLEC9 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Siglec-9 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SIGLEC9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Siglec-9. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SIGLEC9 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.