SHISA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406895

Übersicht

SHISA2 (Mitglied der Shisa-Familie 2) kodiert ein Single-Pass-Transmembranprotein, das an der Regulation von Rezeptorreifung und -transport beteiligt ist und dem eine Rolle bei der Modulation der Signalstärke von Wnt- und FGF-Signalwegen zugeschrieben wird, indem es die Verfügbarkeit von Rezeptoren an der Zelloberfläche steuert. Durch die Beeinflussung der Signalwegstärke und räumlicher Signalcues kann SHISA2 epithelial-mesenchymale Programme, die Dynamik der Zelladhäsion und die Linienspezifizierung während der Entwicklung und Gewebeumgestaltung beeinflussen. Eine veränderte SHISA2-Expression wurde in mehreren transkriptomischen Krebsdatensätzen beobachtet und mit Veränderungen der Invasivität und des metastatischen Potenzials in Verbindung gebracht, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt für die Untersuchung der Plastizität onkogener Signalgebung unterstreicht. In-vitro-Modelle mit SHISA2 als Ziel ermöglichen die Analyse rezeptorvermittelter Signal-Schwellenwerte, kontextabhängiger Signalweg-Überschneidungen (Crosstalk) und nachgeschalteter Transkriptionszustände, die für die Tumorprogressionsbiologie relevant sind.

Das SHISA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SHISA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SHISA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SHISA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SHISA2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SHISA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SHISA2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SHISA2-Exone abzielen, die für die SHISA2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SHISA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SHISA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SHISA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SHISA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SHISA2 HDR-Plasmid (h) und SHISA2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SHISA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SHISA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.