SHISA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406895

Descripción general

SHISA2 (miembro 2 de la familia shisa) codifica una proteína transmembrana de paso único implicada en la regulación de la maduración y el tráfico de receptores, con funciones descritas en la modulación de la señalización Wnt y FGF mediante el control de la disponibilidad de receptores en la superficie celular. Al influir en la intensidad de las vías y en las señales espaciales, SHISA2 puede afectar programas epitelio-mesenquimales, la dinámica de adhesión celular y la especificación de linajes durante el desarrollo y la remodelación tisular. Se ha observado una expresión alterada de SHISA2 en múltiples conjuntos de datos transcriptómicos de cáncer y se ha vinculado con cambios en la invasividad y el potencial metastásico, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico para estudiar la plasticidad de la señalización oncogénica. Los modelos in vitro dirigidos a SHISA2 permiten examinar umbrales de señalización mediada por receptores, el crosstalk entre vías dependiente del contexto y los estados transcripcionales aguas abajo relevantes para la biología de la progresión tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SHISA2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SHISA2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SHISA2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SHISA2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SHISA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SHISA2 para la investigación de la señalización de SHISA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SHISA2 críticos para la función de SHISA2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SHISA2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SHISA2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SHISA2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SHISA2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SHISA2 (h) y el plásmido HDR SHISA2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SHISA2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SHISA2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.