Shank 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425500

Übersicht

Shank3 kodiert Shank 3, ein multidomäniges Gerüstprotein, das in exzitatorischen postsynaptischen Dichten angereichert ist und dort glutamaterge Synapsen organisiert, indem es Rezeptoren und Signalenzymen mit dem Aktin-Zytoskelett koppelt. Über Interaktionen mit PSD-95/GKAP/Homer-Komplexen unterstützt Shank 3 die synaptische Reifung, die Morphogenese dendritischer Dornen (Spines) und aktivitätsabhängige Plastizität und integriert dabei Signalwege wie mGluR-Signalisierung, CaMK/ERK-Kaskaden und Zytoskelett-Remodellierung. In der Maus wird die Shank3-Funktion häufig genutzt, um Mechanismen der synaptischen Homöostase und der Verschaltung neuronaler Schaltkreise zu untersuchen, die neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen zugrunde liegen. Störungen SHANK3-assoziierter Netzwerke werden mit der Biologie von Autismus-Spektrum-Störungen und dem Phelan–McDermid-Syndrom in Verbindung gebracht, wodurch SHANK3 ein wichtiges Ziel für die Modellierung von Synaptopathien in experimentellen Systemen ist.

Das Shank 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Shank3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Shank3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Shank3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Shank 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Shank3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Shank 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Shank3-Exone abzielen, die für die Shank 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Shank3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Shank 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Shank 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Shank3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Shank 3 HDR-Plasmid (m) und Shank 3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Shank3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Shank3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.