Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SH-PTP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400369-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SH-PTP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SH-PTP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und SH-PTP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PTPN6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SH-PTP1: sc-7289
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SH-PTP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400369-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SH-PTP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400369-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTPN6 kodiert die zytosolische Protein-Tyrosinphosphatase SH-PTP1 (SHP-1), einen zentralen negativen Regulator der Signalweiterleitung downstream von Immunrezeptoren und Zytokinrezeptoren. Durch die Dephosphorylierung aktivierter Kinasen und Rezeptorkomplexe dämpft SHP-1 die Signaloutputs der JAK/STAT-, MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Wege und trägt dazu bei, Aktivierungs-, Differenzierungs- und Entzündungsschwellen aufrechtzuerhalten. In humanen Systemen wurde eine veränderte PTPN6-Aktivität mit dysregulierter Immun-Signalgebung, chronischer Entzündung und immunonkologischen Kontexten in Verbindung gebracht, was PTPN6 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Feedback-Kontrolle in hämatopoetischen und Immunzellmodellen macht. Eine funktionelle Perturbation von SHP-1 liefert zudem Erkenntnisse zum Gleichgewicht in Phosphatase-Kinase-Netzwerken und zur Dynamik der rezeptorproximalen Signalgebung.
SH-PTP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PTPN6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PTPN6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PTPN6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PTPN6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.