Sg III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422812

Übersicht

Secretogranin III (Scg3; Sg III) ist ein Protein der Granin-Familie, das im regulierten sekretorischen Weg angereichert ist und dort zur Biogenese sekretorischer Granula, zur Sortierung von Fracht sowie zur Verpackung von Peptidhormonen/Neuropeptiden in endokrinen und neuroendokrinen Zellen beiträgt. In der Maus ist Sg III an der Bildung dichtkerniger Vesikel und der regulierten Exozytose beteiligt und beeinflusst dadurch den vesikulären Transport sowie stimulusgekoppelte Sekretionsprogramme. Eine veränderte Funktion des Granin-Netzwerks wurde mit einer Fehlregulation neuroendokriner Signalgebung und der metabolischen Homöostase in Verbindung gebracht, was Scg3 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Organisation des sekretorischen Weges und der dynamischen, stimulusabhängigen Freisetzung macht. Experimentelle Untersuchungen von Scg3 unterstützen mechanistische Arbeiten zur Vesikelreifung, zur proteolytischen Prozessierung von Prohormonen und zum stressresponsiven sekretorischen Remodeling.

Das Sg III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scg3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scg3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scg3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sg III-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scg3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sg III-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Scg3-Exone abzielen, die für die Sg III-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scg3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sg III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Sg III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scg3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sg III HDR-Plasmid (m) und Sg III HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scg3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scg3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.