Sg II CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402906-ACT

SCG2 kodiert Secretogranin II (Sg II), ein Mitglied der Granin-Familie, das in neuroendokrinen und neuronalen Zellen in dichtkernigen sekretorischen Granula lokalisiert ist und die regulierte Exozytose unterstützt. Durch proteolytische Verarbeitung von Sg II entstehen bioaktive Peptide wie Secretoneurin, die Chemotaxis, Neuritenauswachsung und die Dynamik des sekretorischen Weges modulieren und damit SCG2 mit Vesikelbiogenese, Granula-Azidifizierung und stimulusgekoppelter Sekretion verknüpfen. Über diese Funktionen überschneidet sich die SCG2-Aktivität mit neuroendokrinen Signalnetzwerken und Signalwegen der inflammatorischen Zellmigration. Veränderte SCG2-Expression und Granin-Peptidprofile wurden u. a. im Kontext der Biologie neuroendokriner Tumoren sowie bei neurologischen und metabolischen Erkrankungen mit sekretorischer Dysfunktion beschrieben, was SCG2 zu einem nützlichen Marker und mechanistischen Knotenpunkt für sekretionsfokussierte Studien macht.

Sg II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SCG2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sg II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SCG2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SCG2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sg II-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SCG2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sg II-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sg II-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SCG2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.