Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
SERCA3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402840-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SERCA3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SERCA3 Double-Nickase-Plasmid (h) und SERCA3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP2A3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SERCA3: sc-81759
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SERCA3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402840-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SERCA3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402840-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2A3 kodiert die humane sarco-/endoplasmatische Retikulum‑Ca2+-ATPase SERCA3, eine P‑Typ‑ATPase, die zytosolisches Ca2+ in das Lumen des ER pumpt, um nach Signalereignissen die basalen Calciumspiegel wiederherzustellen. Durch die Kontrolle der ER‑Ca2+-Speicher und zytosolischer Ca2+-Transienten trägt SERCA3 zur Ausprägung calciumabhängiger Signalwege bei, darunter der speicherabhängige Calciumeinstrom (store‑operated calcium entry), die Proteinfaltung und Qualitätskontrolle im ER sowie die Stimulus‑Sekretions‑Kopplung in spezialisierten Zelltypen. Eine veränderte Expression oder Aktivität von ATP2A3/SERCA3 wurde mit einer gestörten Calciumhomöostase, ER‑Stressantworten und Veränderungen von Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht, was für Studien zur Signalübertragung in Immunzellen und zur Epithelbiologie relevant ist. Diese Funktionen machen ATP2A3 zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen der Calciumhandhabung zu untersuchen, die Proliferation, Apoptose und inflammatorische Signalgebung beeinflussen, ohne damit klinische Ergebnisse zu implizieren.
SERCA3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP2A3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP2A3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP2A3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP2A3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.