SENP8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405158

Übersicht

SENP8 kodiert eine Cysteinprotease, die als Deneddylase mit Spezifität für NEDD8-konjugierte Substrate fungiert und zur Aufrechterhaltung der Homöostase des NEDD8-Signalwegs beiträgt. Durch die Modulation des Neddylierungsstatus von Cullin-RING-Ligasen beeinflusst SENP8 den ubiquitinabhängigen Proteinumsatz, den Zellzyklusverlauf und stressresponsive Signalwege. Die SENP8-Aktivität steht außerdem mit der Regulation der DCN1-abhängigen Dynamik der Cullin-Neddylierung sowie der übergeordneten Kontrolle der Proteostase in Zusammenhang. Eine Fehlregulation des NEDD8-Zyklus und der Cullin-Ligase-Aktivität wurde mit onkogenen Phänotypen sowie neuroentwicklungsbedingten oder neurodegenerativen Prozessen assoziiert, was SENP8 zu einem relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien macht.

Das SENP8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SENP8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SENP8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SENP8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SENP8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SENP8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SENP8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SENP8-Exone abzielen, die für die SENP8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SENP8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SENP8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SENP8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SENP8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SENP8 HDR-Plasmid (h) und SENP8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SENP8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SENP8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.