SENP5 Double Nickase Plasmid (h): sc-404428-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SENP5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SENP5 Double-Nickase-Plasmid (h) und SENP5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SENP5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SENP5: sc-293373
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SENP5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404428-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SENP5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404428-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes SENP5 kodiert eine SUMO-spezifische Protease, die SUMO-Modifikationen von Proteinsubstraten entfernt und dadurch die SUMO-abhängige Steuerung von Proteinstabilität, subzellulärer Lokalisation und dem Aufbau makromolekularer Komplexe feinreguliert. Die SENP5-Aktivität trägt zur Koordination der Zellzyklusprogression und mitotischer Ereignisse bei; beschrieben sind unter anderem Funktionen in centrosomen- und nukleolusassoziierten Prozessen sowie bei der Aufrechterhaltung der Proteostase unter zellulärem Stress. Durch die Regulation des Gleichgewichts zwischen SUMOylierung und DeSUMOylierung beeinflusst SENP5 Transkriptionsprogramme und Signalwege der DNA-Schadensantwort, die Zellfitness und Genomintegrität prägen. Eine fehlregulierte Aktivität des SUMO-Systems, einschließlich veränderter Funktionen der SENP-Familie, wurde mit proliferativen Phänotypen und molekularen Merkmalen in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was SENP5 zu einem geeigneten Ansatzpunkt für mechanistische Studien macht.
SENP5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SENP5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SENP5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SENP5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SENP5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.