SEMA6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422888

Übersicht

Sema6b kodiert Semaphorin-6B (SEMA6B), ein transmembranöses Leitsignal, das über Rezeptoren der Plexin-Familie signalisiert und die Zell-Zell-Kommunikation, die Umgestaltung des Zytoskeletts sowie gerichtete Migration reguliert. Im Nervensystem trägt es zur Axonführung, zum Neuritenauswuchs und zur synaptischen Organisation bei und ist in Rho-GTPase- und kinaseabhängige Signalwege eingebunden, die die Dynamik des Wachstumskegels und die Gewebemusterung prägen. Über die Neuroentwicklung hinaus beeinflusst die Semaphorin-Signalgebung die Positionierung von Immunzellen und den vaskulären Umbau und verknüpft SEMA6B-abhängige Prozesse mit Phänotypen, die mit Entzündung und Angiogenese assoziiert sind. Veränderte Semaphorin–Plexin-Signalgebung wurde mit Entwicklungsanomalien und fehlregulierten Programmen der Zellmotilität in Zusammenhang gebracht, die in neurologischen und onkogenen Kontexten relevant sind, was mechanistische Studien in Mausmodellen begründet.

Das SEMA6B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sema6b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sema6b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sema6b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEMA6B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sema6b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEMA6B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sema6b-Exone abzielen, die für die SEMA6B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sema6b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEMA6B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEMA6B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sema6b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEMA6B HDR-Plasmid (m) und SEMA6B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sema6b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sema6b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.