Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6B (m): sc-422888

Présentation

Sema6b code la sémaphorine‑6B (SEMA6B), un signal de guidage transmembranaire qui transmet des signaux via les récepteurs de la famille des plexines afin de réguler la communication cellule‑cellule, le remodelage du cytosquelette et la migration directionnelle. Dans le système nerveux, elle contribue au guidage axonal, à la croissance des neurites et à l’organisation synaptique, en s’intégrant à des voies dépendantes des GTPases Rho et de kinases qui façonnent la dynamique du cône de croissance et la mise en place des patrons tissulaires. Au‑delà du neurodéveloppement, la signalisation des sémaphorines influence le positionnement des cellules immunitaires et le remodelage vasculaire, reliant des processus dépendants de SEMA6B à des phénotypes associés à l’inflammation et à l’angiogenèse. Des altérations de la signalisation sémaphorine–plexine ont été impliquées dans des anomalies du développement et dans des programmes dérégulés de motilité cellulaire pertinents en contexte neurologique et oncogénique, ce qui justifie des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema6b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema6b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema6b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA6B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema6b pour l'étude de la signalisation de SEMA6B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sema6b essentiels à la fonction de SEMA6B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema6b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA6B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA6B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema6b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA6B plasmide HDR (m) et le SEMA6B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema6b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema6b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.