SEMA6A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422887
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- SEMA6A Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im SEMA6A-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SEMA6A: sc-398302
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SEMA6A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422887 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Sema6a kodiert den transmembranären Leitsignalstoff SEMA6A, ein Semaphorin der Klasse 6, der den Aufbau neuronaler Schaltkreise durch die Regulation des Wachstumszapfenverhaltens, der Axonführung und der neuronalen Migration mitprägt. Über Interaktionen mit Plexin-Rezeptoren und nachgeschaltete Signale der Rho-Familie von GTPasen beeinflusst SEMA6A die Zytoskelettdynamik, Zelladhäsion und kontaktvermittelte Repulsion während der Entwicklung. In Mausmodellen wurde eine veränderte Sema6a-Funktion mit Defekten der thalamokortikalen und kortikospinalen Konnektivität sowie mit breiteren neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Mechanismen unterstreicht, die Störungen der neuronalen Verschaltung zugrunde liegen. SEMA6A-abhängige Signalübertragung wird außerdem in Kontexten untersucht, in denen Semaphorin-Signalwege die Zellbeweglichkeit und die Musterbildung in Geweben modulieren.
Das SEMA6A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sema6a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sema6a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sema6a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEMA6A-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sema6a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEMA6A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Sema6a-Exone abzielen, die für die SEMA6A-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sema6a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom SEMA6A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEMA6A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sema6a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEMA6A HDR-Plasmid (m) und SEMA6A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sema6a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sema6a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.