Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6A (m): sc-422887
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- SEMA6A Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique SEMA6A, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SEMA6A Antibody (B-3): sc-398302
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6A (m) | sc-422887 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Sema6a code le signal de guidage transmembranaire SEMA6A, une sémaphorine de classe 6 qui façonne l’assemblage des circuits neuronaux en régulant le comportement du cône de croissance, le guidage axonal et la migration neuronale. Par ses interactions avec les récepteurs plexines et la signalisation en aval des GTPases de la famille Rho, SEMA6A influence la dynamique du cytosquelette, l’adhérence cellulaire et la répulsion médiée par contact au cours du développement. Dans des modèles murins, une altération de la fonction de Sema6a a été associée à des défauts de connectivité thalamocorticale et corticospinale, ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux plus larges, ce qui étaye sa pertinence pour les mécanismes à l’origine des troubles du câblage neuronal. La signalisation dépendante de SEMA6A est également étudiée dans des contextes où les voies des sémaphorines modulent la motilité cellulaire et l’organisation des tissus.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema6a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema6a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema6a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA6A.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema6a pour l'étude de la signalisation de SEMA6A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Sema6a essentiels à la fonction de SEMA6A
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema6a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le SEMA6A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA6A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema6a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA6A plasmide HDR (m) et le SEMA6A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema6a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema6a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.