SEMA5A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422885

Übersicht

Sema5a kodiert den transmembranen Leitsignal-Faktor SEMA5A, ein Mitglied der Semaphorin-Familie, der über rezeptorvermittelte Signalwege, die das Zytoskelett umgestalten, die Axonführung, neuronale Migration und Synapsenbildung reguliert. Neben Funktionen im Nervensystem trägt SEMA5A in mehreren Geweben zu Programmen der Zelladhäsion und -motilität bei und greift in Signalwege ein, die gerichtete Bewegung und Gewebemusterung formen. Eine veränderte SEMA5A-Expression oder -Signalübertragung wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht und in Kontexten untersucht, die abweichende Konnektivität und entzündliche Mikroumgebungen betreffen. In Mausmodellen wird die Störung von Sema5a genutzt, um Mechanismen der Schaltkreisassemblierung zu untersuchen und Leitsignale mit Zustandsänderungen von Zellen während der Entwicklung sowie krankheitsrelevanten Prozessen zu verknüpfen.

Das SEMA5A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sema5a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sema5a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sema5a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEMA5A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sema5a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEMA5A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sema5a-Exone abzielen, die für die SEMA5A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sema5a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEMA5A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEMA5A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sema5a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEMA5A HDR-Plasmid (m) und SEMA5A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sema5a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sema5a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.