SEMA4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422881

Übersicht

Sema4b kodiert den transmembranären Leitsignal-Faktor SEMA4B, ein Semaphorin der Klasse 4, das an kontaktabhängiger Signalübertragung beteiligt ist und Zelladhäsion, Migration sowie den Umbau des Zytoskeletts reguliert. In Mausgeweben trägt SEMA4B zur Axonführung und synaptischen Organisation bei und wurde mit glialen und neuronalen Reaktionen auf entzündliche sowie verletzungsassoziierte Signale in Verbindung gebracht. Die Semaphorin-Signalübertragung greift in Signalwege ein, die Rho-Familien-GTPasen und rezeptorassoziierte Kinasekaskaden steuern, und prägt dadurch gerichtete Motilität und Gewebemusterbildung. Fehlregulierte Semaphorin-Netzwerke, einschließlich SEMA4B-assoziierter Signalwege, werden im Kontext neuroentwicklungsbedingter Störungen, Neuroinflammation und Tumor‑Mikroumgebungs-Interaktionen untersucht, bei denen Leitsignale Invasion und die Positionierung von Immunzellen beeinflussen.

Das SEMA4B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sema4b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sema4b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sema4b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEMA4B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sema4b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEMA4B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sema4b-Exone abzielen, die für die SEMA4B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sema4b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEMA4B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEMA4B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sema4b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEMA4B HDR-Plasmid (m) und SEMA4B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sema4b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sema4b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.