SEMA4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422880

Übersicht

Sema4a kodiert Semaphorin-4A (SEMA4A), ein membranassoziiertes Leitsignal, das zugleich als immunregulatorischer Ligand wirkt und die Zell-Zell-Kommunikation beeinflusst. Bei Mäusen trägt SEMA4A zur Axonführung und zur Organisation von Synapsen bei und moduliert zugleich die Aktivierung und Differenzierung von T-Zellen sowie die Interaktionen mit antigenpräsentierenden Zellen über Semaphorin-Signalnetzwerke und rezeptorvermittelte Signalwege. Diese Prozesse greifen in Zytoskelett-Remodelling, Zellmigration und entzündliche Signalprogramme ein, die die Gewebehomöostase prägen. Eine fehlregulierte Sema4a-Aktivität wurde mit immunvermittelter Pathologie und neuroinflammatorischen Mechanismen in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in Modellen der Autoimmunität, Neurobiologie und Entzündung von Barrieregeweben unterstützt.

Das SEMA4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sema4a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sema4a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sema4a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEMA4A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sema4a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEMA4A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sema4a-Exone abzielen, die für die SEMA4A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sema4a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEMA4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEMA4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sema4a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEMA4A HDR-Plasmid (m) und SEMA4A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sema4a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sema4a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.