SEMA3F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422879

Übersicht

Sema3f kodiert Semaphorin‑3F (SEMA3F), ein sezerniertes Leitsignal, das hauptsächlich über Neuropilin‑ und Plexin‑Rezeptorkomplexe vermittelt wird und die Zytoskelettdynamik, Zelladhäsion und gerichtete Migration reguliert. Durch die Modulation der Aktivität von Rho‑Familien‑GTPasen und des nachgeschalteten Aktin‑Remodelings beeinflusst SEMA3F die Axonfindung, die vaskuläre Musterbildung und die Organisation epithelialer Gewebe. Im Immun‑ und Stromamikromilieu kann SEMA3F‑abhängige repulsive Signalgebung die Positionierung und Motilität von Zellen formen und mit Outputs der Integrin‑, MAPK‑ und PI3K‑Signalwege zusammenwirken. Eine dysregulierte SEMA3F‑Signalgebung wurde in krankheitsrelevanten Modellen mit veränderten angiogenen und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht und spricht für den Einsatz in mechanistischen Studien der Entwicklung und Tumorbiologie.

Das SEMA3F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sema3f-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sema3f-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sema3f nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEMA3F-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sema3f-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEMA3F-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sema3f-Exone abzielen, die für die SEMA3F-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sema3f-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEMA3F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEMA3F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sema3f-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEMA3F HDR-Plasmid (m) und SEMA3F HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sema3f-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sema3f-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.