Plasmide CRISPR d'Activation (h) SEMA3C: sc-402489-ACT

SEMA3C code la sémarine-3C, un signal de guidage sécrété qui transmet ses effets via les récepteurs neuropiline et plexine afin de réguler la dynamique du cytosquelette, la migration directionnelle et les interactions cellule–cellule. Au-delà du guidage axonal, SEMA3C contribue au patronnement vasculaire et au remodelage tissulaire en modulant des voies qui interfèrent avec les GTPases de la famille Rho, le renouvellement des adhérences focales et l’adhésion dépendante des intégrines. Une expression dérégulée de SEMA3C a été rapportée dans des contextes de signalisation angiogénique aberrante, de comportement cellulaire invasif et de communication stroma–tumeur altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des microenvironnements liés au développement et aux maladies. Son activité est couramment étudiée dans des modèles de plasticité épithéliale et endothéliale, d’organisation de la matrice extracellulaire et de signalisation des sémarines médiée par les récepteurs.

SEMA3C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SEMA3C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SEMA3C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SEMA3C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SEMA3C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SEMA3C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SEMA3C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SEMA3C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SEMA3C dans les cellules tumorales présentant une expression de SEMA3C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.